Для успешного результата протокола ЭКО необходимо тщательно и хорошо контролировать все этапы процедуры. Одной из важных стадий является качественная оценка ооцитов (яйцеклеток) и оплодотворенных вне организма эмбрионов, выбранных для переноса в матку.
От результатов этого во многом зависит, насколько удачными будут попытки экстракорпорального оплодотворения и вынашивание долгожданной беременности.
Процесс скрининга яйцеклеток с целью отбора на ЭКО, чтобы использовать максимальные шансы на беременность, проводится до экстракорпорального оплодотворения. Оценка и отбор эмбрионов — после.
Что такое качество ооцита
Многих пациенток, проходящих протокол ЭКО, волнует вопрос, можно ли улучшить качество ооцитов. Ведь, хотя сперматозоид и вносит существенный вклад в формирование нового человека, судьба зародыша в основном определяется яйцеклеткой.
Для успешного оплодотворения она должна достичь определенной стадии зрелости, и только тогда будет способна взаимодействовать со сперматозоидом и создать после оплодотворения жизнеспособный здоровый эмбрион.
Влияет ли возраст женщины на качество яйцеклеток?
Яйцеклетки закладываются в яичниках девочки еще до ее рождения, потом на протяжении жизни новые не образуются, а лишь созревают в фолликулах в соответствии с женским репродуктивным циклом.
На то, каковы они будут влияет много факторов: возраст, образ жизни, уровень выработки гормонов и т.д.
Добиться улучшения качества репродуктивных клеток непросто, нужно сочетание медицинских методов и соблюдения ЗОЖ с ранних лет.
Молодые женщины обладают яйцеклетками достаточно хорошего качества для зачатия и рождения детей. Но возраст влияет на репродуктивный потенциал отрицательно, после 35 лет половые клетки могут постепенно утрачивать морфологические признаки зрелости, необходимые для формирования полноценного плода.
В этом случае мы улучшаем ожидаемый результат проведением соответствующей гормональной терапии (стимуляции).
При процедуре ЭКО до взятия яйцеклеток с помощью пункции проводится стимулирующая гормональная терапия, нацеленная на ускоренное созревание яйцеклеток и позволяющая улучшить их показатели.
Роль и работа яйцеклетки
Яйцеклетка созревает в фолликуле яичника, это самая крупная отдельная клетка организма.
Фолликул — особая структура, которая отвечает за питание и регуляцию созревания яйцеклетки.
Последовательные ядерные и цитоплазматические изменения по мере роста фолликулов — как при естественном, так и при стимулированном цикле — очень важны, в ходе их синтезируются и аккумулируются необходимые для развития плода соединения.
Яйцеклетки окружены защитной гликопротеиновой, т.н. блестящей оболочкой (при микроскопии заметно, как она преломляет свет).
Зрелый, он покрыт фолликулярным эпителием (кумулюсом), образуя ооцит-кумулюсный комплекс (ООК).
Яйцеклетка — клетка с уникальной высокоспециализированной дифференциацией, от нее зависит:
- создание, активация и контроль эмбрионального генома;
- поддержка основных процессов (клеточный гомеостаз, метаболизм и развитие клеточного цикла на раннем этапе эмбриогенеза).
Как проверяют качество ооцита?
Все данные по оценке яйцеклеток и оплодотворенных зародышей вносятся в эмбриологический протокол – документ, последовательно фиксирующий все показатели при любой процедуре ЭКО.
Приемлемость женской репродуктивной клетки — понятие многофакторное и включает ряд характеристик.
В клинической практике ооциты, точнее ооцит-кумулюсные комплексы (ООК), оценивают по критериям:
- зрелости (основной определяющий фактор);
- размеру;
- морфологии.
Именно от этих параметров зависит последующее благополучное развитие оплодотворенного зародыша.
Начальный скрининг ооцитов проводится врачом-эмбриологом с помощью визуального наблюдения в бинокулярный микроскоп с помощью стандартного света или микроскопии в поляризованном свете непосредственно после получения ООК методом трансвагинальной пункции преовуляторных фолликулов яичника.
В ходе проверки качества женских репродуктивных клеток, их оценивают по визуальному виду таких структур:
- цитоплазма;
- полярное тельце;
- вителлиновый слой.
О качестве свидетельствует однородность и единый цвет цитоплазмы, отсутствие гранул. В зрелых ооцитах заметно первое полярное тельце.
Об ее отсутствии – деформации, темный цвет, присутствие вакуолей и гранул.
В эмбриологическом протоколе ОКК, кумулюс которого визуально прозрачен, получает оценку «1-1», он содержит зрелый ооцит.
Окончательную оценку состояния проводят врачи после очистки ооцита перед проведением оплодотворения.
- Зрелый, готовый к оплодотворению ооцит обозначают аббревиатурой MII.
- Незрелые, неподходящие – MI и GV.
- Deg – с полной дегенерацией.
Наряду с качественными яйцеклетками возможно получение незрелых, дегенеративных и разрушенных.
В среднем, среди ооцитов в стимулированном цикле, большинство — готовы к оплодотворению, 5-20% — незрелые, при правильной терапии их статус можно повысить, 2-5% — дегенеративные, т.е. не пригодны.
Процент неподходящих клеток увеличивается в зависимости от возраста.
Оценка начального качества эмбрионов и на 2-3 день развития
Тщательная оценка результативности оплодотворения проводится регулярно в продолжение определенных промежутков времени с помощью выверенных методов анализа в лаборатории.
В течение суток, последующих за взятием преовуляторных яйцеклеток, которые считают первым днем развития эмбриона, врачи наблюдают первичную динамику прошедшего оплодотворения яйцеклетки.
Презигота и зигота
После соединения генетического материала донора спермы и яйцеклетки в лаборатории in vitro, путем ли их непосредственного слияния (ЭКО), или инъекционного внедрения генома сперматозоида в яйцеклетку (ИКСИ), спустя 16-18 ч. наблюдается стадия презиготы. которая представляет собой ооцит, в котором имеются женский и мужской пронуклеусы, но их генетический материал наблюдается по отдельности и еще не прошел слияние.
В организме (т.е. in vivo) эта стадия оплодотворения проходит в фаллопиевой (маточной) трубе.
Врач-эмбриолог в течение первых суток оценивает, насколько адекватно состоялся процесс оплодотворения.
В норме правильно прошедший его ооцит содержит 2 видимых пронуклеуса, прочие варианты являются аномальными отклонениями и исключаются из дальнейшего культивирования.
Зигота (оплодотворенная яйцеклетка) — эмбрион в первые сутки развития, пронуклеусы уже слились, и началось клеточное деление.
Фаза дробления отсчитывается от вторых суток эмбриогенеза (т.е. 2-3 день). Дроблением называют синхронное клеточное деление зиготы на одинаковые бластомеры, которые обладают тотипотентностью, т.е. имеют возможности дать начало любой клетке организма.
На стадии дробления пригодность зародыша для ЭКО оценивают по степени одинаковости бластомеров: чем более они равномерны, тем он адекватнее по критериям для имплантации.
Его оценка на этой стадии развития проводится по:
- числу бластомеров (с их цифровой кодификацией);
- другим критериям, к примеру, насколько равномерны бластомеры, имеются ли фрагментации и пр. — записывается с помощью букв a, b, c, d и их сочетаний.
4-е сутки эмбрионального развития
В первые трое суток эмбриогенеза деление клеток идет бинарно — каждая из них надвое, используя энергию из запасов самой яйцеклетки.
Четвертые сутки – точка отсчета начала клеточной дифференциация, часть из них даст начало формированию зародыша, от прочих зависит обеспечение правильной имплантации его в эндометрий матки и формирование плаценты.
3-4 сутки от оплодотворения — время максимальной чувствительности к негативным воздействиям.
Морула
Зигота путем эмбрионального деления превращается в морулу.
На третьи-четвертые сутки происходит образование морулы, так называют эмбрион, состоящий из приблизительно 16-32 клеток (бластомеров), сферической формы.
Достигнув 16-клеточной стадии, морула дифференцируется:
- внутренние бластомеры становятся эмбриобластами;
- поверхностные — трофобластами.
В процессе бластомеры образуют компактную шарообразную структуру, межклеточные контакты укрепляются, внешняя поверхность морулы сглаживается, происходит компактизация.
Для оценки качества морулы используют критерий компактизации.
| Обозначение | Степень компартицации | Оценка качественнсти |
| А | Полная, 100% бластомеров. Клеточные мембраны визуализируются не четко, безъядерные элементы отсутствуют | наиболее высокая |
| В | компактизованы 75% бластомеров и более, безъядерных элементов менее 20%. Эмбрион сферичой формы с гладкой поверхностью | средняя |
| С | Частичная, средняя — 50% бластомеров. Безъядерных элементов 20 — 50% | удовлетворительная |
| D | бластомеров менее 50 %, наблюдаются некомпактизовавшиеся и фрагментарные, безъядерных 50% и более. | некачественный |
Оценка оплодотворения в стадии бластоцисты
В норме, период от завершения 4-х до середины 6-х суток развития эмбриона (в среднем, наиболее часто — 5-е сутки, очень редко на 7-е) происходит переход к формированию следующей стадии.
При переходе на нее в моруле образуется бластоцистозная полость — пространство, заполненное жидкостью. Когда она достигает 20% от объема морулы, последняя именуется бластоцистой.
Это наиболее сложно организованная стадия эмбриона, которая существует в лаборатории ЭКО вне тела матери (до имплантации в полость матки).
После стадии бластоцисты, прошедшие самый пристальный и строгий отбор полноценные эмбрионы будут имплантированы женщине.
В строении бластоцисты выделяют две клеточные группы:
- трофэктодерма (наружный слой — однослойный эпителий поверх бластоцистозной полости) — в дальнейшем даст начало плаценте и всем зародышевым оболочкам;
- внутриклеточная масса (прилегающие друг к другу клетки, образующую саму бластоцисту) – материал для формирования всех тканей и органов плода.
На стадии бластоцисты оценить качественные характеристики эмбриона довольно непросто вследствие сложности его структуры.
Но все же основные критерии сводятся к:
- размеры бластоцистозной полости;
- качество трофэктодермы;
- качество внутренней клеточной массы.
Оценка кодифицируется буквенно-цифровым обозначением, где от 1 до 4 оценивается размер бластоцистозной полости, а латинскими литерами А — С характеризуется внутриклеточная масса (первая буква) и трофэктодерма (соответственно, вторая).
Также принимается во внимание стадия прохождения бластоцистой этапа «хетчинга» — разрыва ею окружающей эмбрион гладкой «блестящей» оболочки (в ходе естественного оплодотворения последняя облегчает прохождение бластоцисты по маточным трубам в полость матки и прикрепление):
- Цифра 5 присваивается бластоцисте, прошедшей «хетчинг».
- Цифра 6 – если бластоциста не просто прошла его, а успела полностью высвободиться из «блестящей» оболочки.
При определении качества эмбриона более приоритетное значение имеет буквенная классификация, нежели цифровое обозначение размера бластоцистозной полости.
Поскольку эмбрионы обладают вариативными индивидуальными особенностями, и каждый может развиваться в разном темпе, поэтому любой показатель полости (число) лежит в границах нормы.
Показатели степени развития трофэктодермы и внутриклеточной массы:
- А — наилучшее качество;
- С — наихудший вариант.
| Обозначение | Количество клеток и их плотность в бластоцисте | Оценка |
| А | Больше, расположены плотно | Отличное |
| В | Среднее, рыхло | Среднее |
| С | Минимальное | Плохое |
| Обозначение | Состояние трофэктодермы (число клеток) | Оценка |
| А | много | Отличное |
| В | среднее количество | Среднее |
| С | мало | Плохое |
Для примера, по приведенной классификации оценки качества эмбрионов по бластоцитам:
- превосходного качества: 3АА-6АА (включительно);
- среднего качества 1АВ, 2ВВ и пр.;
- оценка С — качество плохое, не подходят, не смотря на числовые характеристики.
4АА является более предпочтительным, нежели 2ВВ.
Как улучшить шансы на успешное проведение ЭКО?
При отборе яйцеклеток для оплодотворения использовать имеющие максимальные оценки качества, а эмбрионы для подсадки в матку — те, у которых наивысшие буквенные показатели. Ориентироваться в них поможет приведенная информация данного сайта.
По принятому протоколу для проведения ЭКО при лечении бесплодия отбираются 1-3 эмбриона лучшего качества из оплодотворенных.
Скрининг приемлемости яйцеклеток позволяет провести отбраковку не надлежащего качества и дает право отобрать генетический материал, наиболее подходящий для ЭКО.
Если надлежащие эмбрионы были получены в большем количестве, то «запасные» экземпляры подвергаются криоконсервации («заморозке») в банке спермы, что повышает перспективы при неудачности предыдущих попыток.